通用型 ECL 显色试剂盒

通用型 ECL 显色试剂盒

增强型 ECL 化学发光检测试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及 HRP 标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP 标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的 ECL 工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于 X 光片曝光暗盒。然后转入暗室将 X 光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在 X 光胶片上。

产品组分

A 液

B 液

运输与保存方法

常温运输。频繁使用可置于室温保存，一年稳定；长期不用，建议置于 4 oC 保存延长效期?！咀ⅰ浚篈 液需避光保存！

操作方法（以 X 光胶片为例）

 1. 执行常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或者 HRP 标记核酸探针孵育、洗膜?！咀ⅰ浚篍CL 发光液是 HRP 的显色底物，因此检测系统最终必须基于 HRP 酶标记抗体或者核酸探针。 

2. 最后 1 次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液（推荐 100-200 μL 发光液/cm2 膜）：分别取等体积的 A 液和B 液，混匀备用?！咀ⅰ浚喝?A 液和 B 液一定要用不同的枪头；另建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。 

3. 用平头镊取出膜，搭在滤纸上沥干洗液，勿使膜全干燥。用移液器将工作液加到膜上，使之充分接触。室温孵育 1-2 min，准备立即压片曝光。4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余液体，留下少量工作液，不可让膜全干燥。 

5. 在 X 光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来全包裹印迹膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

 6. 暗房内取一张 X 光胶片至于包裹的膜上，压片，曝光 30 sec-2 min，显影定影冲洗?！咀ⅰ浚浩毓馐奔湫韪萜毓馇慷茸鱿嘤Φ牡髡?。若是背景过高，可使用两张 X 光胶片同时压片。 

曝光方法 

使用 CCD 拍照：可以将膜放置于工作液中，开机后按照使用说明，将膜取出，进行拍照。另外，也可以根据情况，调整机器测量参数，提高信噪比。 

注意事项 

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

2）转膜、封闭、孵育都需要避免气泡，另外戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干净。 

3）长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。 

4）某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜

5）避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。 

6）使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 

7）使用生物素-亲和素系统，避免使用牛奶封闭，可能会导致背景过高。 

8）金属氧化物颗?？赡芑嵩斐赡ど铣鱿挚帕Ｗ窗叩?，避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子，建议使用塑料的平头镊子。

 9）叠氮*钠（NaN3）能抑制 HRP 活性，若回收 HRP 标记探针或者抗体应避免使用 NaN3，如必需使用勿超过 0.01%。 

10）本品无特殊毒性，按普通化学品处理。11) 本产品仅作科研用途!

问题与解决方案

上海牧荣生物科技有限公司

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