过研究体内组织来源的细胞,可以对细胞的生物学和功能进行有效的预测,但这需要对靶标细胞群体进行分离,否则生物学的复杂性可能导致结果混淆。为了对细胞表型进行研究,目前已开发出多种基于明确特征对细胞群体进行分离的不同方法。对细胞群体进行分离不仅有助于生物学研究,而且也能促进临床上的诊断性检测。有效的分离方法应具备出色的产量、纯度和活力??赏ü蜓≡瘢ㄍǔ2捎媒岷舷赴匾煨员曛疚锏目固澹┗蚋合蜓≡瘢ɑ谏镂锢硖匦越恍枰南赴腥コ佣患斜晗赴禾澹├词迪侄园斜晗赴禾宓母患虼炕?。
长期以来,将细胞分离成各种亚细胞成分一直都是细胞生物学研究的基础。亚细胞分离技术已广泛用于研究细胞器和亚细胞区室的结构和功能,以及了解生物分子的定位、加工和运输。大多数分离技术都旨在获得处于功能性状态的细胞器和细胞大分子,此时它们仍保留其固有的生化特性。这通常通过采用温和的机械方法或使用温和的去污剂进行细胞裂解,然后通过差异离心将细胞成分进行分离来实现。
为了评估脂质裂解、细胞信号转导、内分泌功能和代谢活性,可以使用前脂肪细胞来研究脂肪形成和分化后的过程。
我们的前脂肪细胞分离试剂盒包含了从脂肪组织中分离基质血管细胞成分所需的工具和试剂。所得到的基质血管成分将会培养在前脂肪细胞所粘附的组织培养板上。前脂肪细胞保留了增殖以及在使用诱导分化成分处理时可分化为脂肪细胞的能力。
亚细胞成分的衍生可促进对细胞器功能的理解,并催生新的生物技术。例如,从哺乳动物细胞中分离出的细胞核可后续用于合成内源性RNA初级转录本。我们已开发出了高产量的Nuclei EZ Prep试剂盒,可快速分离出大多数哺乳动物的细胞核。
为了检测线粒体的完整性和膜电位,我们的线粒体染色试剂盒使用了JC-1染料,其会集中在线粒体基质中并形成红色荧光团。细胞凋亡等能够消耗线粒体膜电位的事件会阻止JC-1染料在线粒体中的积累,因此可利用荧光显微镜来区分具有活力的线粒体和受损的线粒体。
另外,也可分离非细胞器的亚细胞复合物(如蛋白酶体),将其用于蛋白水解测定。我们使用含有一段GST融合蛋白的亲和基质微珠进行分离,该融合蛋白具有可与GST-琼脂糖结合的泛素样结构域。
传统上,研究与肌动蛋白细胞骨架相关的蛋白都很棘手,因为细胞骨架元素不溶于类似于Triton X-100的去污剂。Millipore ProteoExtract细胞骨架富集和分离试剂盒带有细胞骨架纯化缓冲液,能够保留粘着斑和肌动蛋白相关蛋白并同时从细胞中去除可溶性细胞质和核蛋白。该方法可增强检测并研究低丰度肌动蛋白相关蛋白的能力,而这些蛋白在使用Western blotting分析全细胞裂解物时通?;岜谎诟堑?。