抗酸杆菌染色方案

分枝杆菌细胞壁含有由分枝菌酸组成的蜡状物质。这些是链长最多 90 个碳原子的 ?-羟基羧酸。耐酸牢度的特性与任何特定物种中发现的分枝菌酸的碳链长度有关（Lyon H 1991）。

碱性品红与细菌中带负电的基团结合。分枝菌酸（和其他细胞壁脂质）对染料进入和洗脱（用溶剂洗掉）构成障碍，通过在碱性品红浓水溶液中添加亲脂剂和部分加热可以部分克服这一障碍。

技术要点： 包括一个控件

方法

1. 将工作溶液放入科普林罐中，并在 58 -60 ℃水浴中预热10 分钟。

2. 将切片脱蜡，放入水中。

3. 在水浴中预热的工作溶液中染色 15 分钟。

4. 将装有载玻片的 COPLIN JAR放入流动的冷自来水中 2 分钟。

5. 从科普林罐中取出载玻片并用流水清洗 1 分钟。

6. 在酸性酒精中进行分化，直到载玻片上不再有颜色流出。

7. 用水短暂清洗以除去酸性酒精

8. 用亚甲蓝复染 15 至 30 秒。

9. 水洗、脱水、澄清并封固在 DPX 中。

结果

• 抗酸杆菌................................................红色

• 细胞核................................................蓝色

• 其他组织成分................................蓝色

试剂配方

1、染色液：

库存溶液 A（稳定 6 个月）

                        LOC 高泡沫（安利）....... 0.6 毫升

                        蒸馏水............................ 100 毫升

            库存溶液B       

                        碱性品红...................................... 1克

                        无水乙醇...................... 10 毫升

            这两种溶液可以作为储备溶液保存并在使用前混合。

2. 工作液（稳定1个月）

                    将 50ml A 与 5ml B 混合。

3.酸性醇——3%盐酸溶于95%乙醇

                        无水乙醇......................... 95ml

                        蒸馏水......................2毫升

                        浓盐酸...3毫升

            配制酒精溶液，然后加入浓酸。当

            处理浓酸。

4. 1%乙酸中的0.25%亚甲蓝

亚甲基蓝........................0.25克

蒸馏水................................99毫升

乙酸...................................... 1 毫升